莊盟生物

當前位置:首頁 - 產品中心 - 腺相關病毒

產品名稱:rAAV基因抑制表達技術服務(ZC5000-3)

貨號 規格 價格 訂購數量 是否現貨
ZC5000-3 貨期4周 20 x 50μl 詢價 - + 有貨

包裝容量大,最高可容納7kb外源DNA片段

低吸附醫用包裝材料配合專業產品稀釋液,降低產品二次損耗


腺相關病毒(Adeno-Associated Virus,AAV)為微小病毒科 (Parvovirus)依賴病毒屬(Subvirus)的單鏈線狀DNA病毒,無包膜,基因組約4700bp,衣殼蛋白呈20面體立體對稱,病毒顆粒的直徑在20-26nm之間。根據衣殼的差異,目前AAV可分為13種血清型(AAV1~AAV13)和100多種變異體,可感染不同組織的細胞。

重組腺相關病毒(Recombinant Adeno-associated Virus, rAAV)具有免疫原性低、轉染效率高、表達時效長的特點,是進行外源基因轉導和表達研究的優良載體,也是目前唯一獲得歐盟委員會(EC)認證上市的基因治療藥物Glybera所使用的載體。本公司生產的重組腺相關病毒采用最為安全和經典的三質粒共轉染技術,不需輔助病毒,產品具有獨特的安全性、可靠性和穩定性,特別適合對基因治療載體要求高的臨床前或臨床試驗。


■ 技術服務內容

1.服務類型:

rAAV-基因抑制表達


2.服務內容:

客戶可根據需要提供基因及啟動子信息,選擇不同的血清型、單雙鏈、病毒滴度、純化級別等,具體內容見下表:

選擇項目

基因抑制表達系列

可選血清型

1-13/DJ

/雙鏈

/

啟動子

任意常見小RNA啟動子

基因

任意常見功能小RNA

需客戶提供

啟動子和功能小RNA序列

規格

總量>=1012 vg,病毒滴度客戶可自選,分裝規格客戶自定

純化級別

粗提液/80%純度/90%純度/95%純度/99%純度,客戶自選


3.服務流程:



4.服務優勢:

(1)包裝容量大:最高可容納7Kb外源DNA片段,打破rAAV載體包裝容量小,最多只能容納4.7kb外源DNA片段的限制。

(2)穩定性高:低吸附醫用包裝材料配合專業產品稀釋液,降低產品二次損耗。產品-80℃質保期6個月(物理滴度下降<10%)。

(3)超高滴度:可定制高于1016vg/ml超高滴度產品,非常適合大批量試驗。

(4)超高純度:可定制高于99%的超高純度產品,完全滿足臨床試驗需求。

(5)血清型全:可生產AVV1-AVV12、DJ現有所有主流血清型。

(6)活性高:細胞水平最低轉染滴度僅需103vg/cell,動物系統給藥最低只需1011vg/kg。

(7)內毒素低:內毒含量<5eu,可定制。

(8)單雙鏈齊全:所有血清型均可生產單雙鏈產品。

(9)產品完全定制化:產品所有元件都可以根據客戶需求進行定制。

(10)質控齊全:GLP中試環境,可實現高達15項產品質控,滿足不同的實驗需求。


5. 部分質控展示:

(1)產品衣殼鑒定(必做):

采用SDS-PAGE,Western blot方法進行rAVV的初步表征與鑒定。通過 VP1、VP2、VP3蛋白的含量及其比例(VP1:VP2:VP3約為1:1:10)來鑒定產品是否為經典rAAV。



(2)純度質控:

①銀染法(必做):采用SDS-PAGE,銀染法可以進一步分析rAVV的VP1,VP2 和VP3的蛋白總量和總蛋白的比例,分析rAVV的純度。



②HPLC分析(可選):液相色譜是病毒分離純化的重要方法,同時也是病毒純度檢測的一種形式。高純度的rAAV可以看到一個清晰的高而尖銳的洗脫峰,不見其他雜峰,否則雜質較多。



(3)滴度質控(必做):

通過qPCR的方法檢測rAAV基因組的拷貝數并同標準樣品相比較來確定病毒滴度,滴度單位為vg/mL。如下圖所示,既能顯示對于產品的病毒滴度,同時也體現了公司滴度測試體系的可靠性與穩定性。




(4)內毒素質控(可選):

公司采用成熟的絕對標準曲線法進行內毒素檢測


(5)活性檢測(可選):

測試目的基因導入受體細胞后,能表達并能達到治療效果。下圖分別為產品感染NCIH446和HEK293細胞的測試圖。

產品感染NCIH446測試細胞(MOI:1E+4)

產品感染HEK293測試細胞(MOI:1E+4)


■ 附注

1.血清型選擇:

血清型

組織親和性

AVV1

肌肉、心臟、骨骼(包括心肌)、神經組織

AVV2

中樞神經、肌肉、肝臟、腦組織、眼

AVV3

肌肉、肝臟、肺、眼

AVV4

中樞神經、肌肉、眼、腦

AVV5

肺、眼、中樞神經、關節滑膜、胰腺

AVV6

肺、心臟

AVV7

肌肉、肝臟

AVV8

肝臟、眼、中樞神經、肌肉

AVV9

心臟、肌肉、肺(肺泡)、肝臟、中樞神經

DJ

肝臟、視網膜、肺、腎臟


2.常見啟動子選擇:

(1)CAG:廣泛的通用啟動子

(2)CMV:優化的高效通用啟動子

(3)CB:截短型通用啟動子

(4)EF1a廣泛的通用啟動子

(5)SYN:神經元細胞特異性啟動子

(6)CaMKII:海馬體特異性神經元細胞特異啟動子

(7)GFAP:星形膠質細胞特異啟動子


3.不同病毒的生物學特性比較

項目

慢病毒

逆轉錄病毒

腺相關病毒

腺病毒

包膜

顆粒直徑

90-100 nm

90-100 nm

20-30 nm

60-90nm

基因組

dsRNA

dsRNA

ssDNA

dsDNA

免疫原性

中免疫原性

中免疫原性

低免疫原性

高免疫原性

表達起始時間

48-72h

48-72h

12-96h

24-48h

表達持續時間

> 2 months

> 2 months

> 6 months

< 1 month

表達豐度

高水平表達

非分裂細胞表達極低

高水平表達

高水平表達

整合方式

隨機高頻整合

隨機高頻整合

定向低頻整合

非整合


4.不同AAV血清型對相同的組織和細胞具有不同的感染效率

Cell Line

AAV-1

AAV-2

AAV-3

AAV-4

AAV-5

AAV-6

AAV-8

AAV-9

AAV-DJ

Huh-7

13

100

2.5

0.0

0.1

10

0.7

0.0

500

HEK293

25

100

2.5

0.1

0.1

5

0.7

0.1

500

HeLa

3

100

2.0

0.1

6.7

1

0.2

0.1

667

HepG2

3

100

16.7

0.3

1.7

5

0.3

ND

1250

Hep1A

20

100

0.2

1.0

0.1

1

0.2

0.0

400

911

17

100

11

0.2

0.1

17

0.1

ND

500

CHO

100

100

14

1.4

333

50

10

1.0

25000

COS

33

100

33

3.3

5.0

14

2.0

0.5

500

MeWo

10

100

20

0.3

6.7

10

1.0

0.2

2857

NIH3T3

10

100

2.9

2.9

0.3

10

0.3

ND

500

A549

14

100

20

ND

0.5

10

0.5

0.1

1000

HT1180

20

100

10

0.1

0.3

33

0.5

0.1

333

Monocytes

1111

100

ND

ND

125

1429

ND

ND

100

Immature DC

2500

100

ND

ND

222

2857

ND

ND

200

Mature DC

2222

100

ND

ND

333

3333

ND

ND

100








夜夜澡 人人碰 人人看,夜夜橾天天橾在线视频,天天夜夜日日高清在线-首页