莊盟生物

當前位置:首頁 - 產品中心 - 分子克隆相關產品

產品名稱:NMY51菌株(ZK286)

貨號 規格 價格 訂購數量 是否現貨
ZK286 0.3ml/支 975 - + 有貨

■ 產品介紹

DUALmembrane系統是DUALsystems BioTech公司開發的專門篩選跨膜蛋白間相互作用的檢測技術,它利用分離的泛素系統(split-ubiquitin)直接檢測天然狀態下膜蛋白間的相互作用,是目前市面上唯一檢測膜蛋白間相互作用的酵母雙雜系統。此系統采用NMY51酵母菌株,可直接轉化質粒進行蛋白互作驗證或篩庫試驗;此菌株Transformation marker為: trp1,leu2-3,報告基因為:HIS3,ADE2和lacZ,第一步通過營養缺陷型報告基因(HIS3,ADE2)進行選擇性生長篩選,進一步通過LacZ報告基因進行β-半乳糖分析顯色的定量或半定量篩選,三個獨立的報告基因,受不同啟動子的調控,降低假陽性幾率。原理:泛素(ubiquitin)分子量很小,由76aa殘基組成;泛素作為降解信號分子,可以連接另外一種蛋白質的N端,然后被泛素專一性蛋白酶(UBPs)識別,從而導致與泛素相連的蛋白被酶解。泛素可以人為分成兩部分:N端(Nub),C端(Cub)。首先,人為地將泛素Nub的3位異亮氨酸突變為甘氨酸(NubI突變為 NubG)。這樣與Cub的親合力大大降低,避免了Cub和Nub自我結合或接近的可能性。其次,將Cub 部分與人工合成的 LexA-VP16 轉錄激活因子融合成一個融合蛋白Cub-LexA-VP16。正常條件下 NubG不與Cub 結合,UBPs也不能識別分離的泛素,轉錄激活因子也不會被切下來。最后,將要檢測的蛋白質分別與NubG和Cub融合,形成bait融合蛋(bait-cub-LexA -VP16)和prey融合蛋白(prey-NubG)。如果bait和prey發生相互作用,就會促使NubG和Cub的相互接近,被UBPs識別,導致 LexA-VP16的解離,進入核內,從而激活報告基因的轉錄。此系統可使用四種Bait質粒:pBT3-N,pBT3-SUC,pBT3-STE,pBT3-C,篩選標志均為LEU;三種Prey質粒:pPR3-C,pPR3-SUC,pPR3-STE,篩選標志均為TRP。NMY51酵母菌株可用YPDA在28℃有氧的條件下培養,然后使用30%的甘油保藏菌種。

基因型為:MATahis3Δ200trp1-901leu2-3,112ade2LYS2::(lexAop)4-HIS3ura3::(lexAop)8-lacZ ade2::(lexAop) 8-ADE2 GAL4


■ 基本信息

培養基:YPD/YPDA

菌株類別:酵母菌

培養條件:28℃,有氧,YPD/YPDA

質粒轉化:化轉/電轉

保存方式:30%甘油,-80℃

基本應用:酵母雙雜交

夜夜澡 人人碰 人人看,夜夜橾天天橾在线视频,天天夜夜日日高清在线-首页